张娟，孙丽莎，王虹
（焦作市第二人民医院妇科，河南 焦作 454150）
宫颈癌是原发于子宫颈部位的恶性肿瘤，在宫颈癌早期及时进行手术治疗，治愈率可达到80%以上，但单一的宫颈癌根治术仍可能出现宫颈癌复发情况[1]。相关研究发现，宫颈癌复发部位从高到低依次为盆壁、宫旁和宫颈，复发因素主要包括术后恢复、治疗方法、疾病分期与疾病类型，术后护理及术后饮食也是导致宫颈癌复发的重要因素[2]。Zeste基因增强子人类同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)是一种组蛋白赖氨酸N-甲基转移酶，其过表达与多种癌症的发生发展相关[3]。乳腺癌转移抑制基因1(breast cancer metastasis suppressor 1，BRMS1)是在乳腺癌细胞中发现的一种肿瘤转移抑制基因，可降低乳腺癌细胞的转移潜能[4]；
早期宫颈癌复发与其临床病理特征有密切相关性，但其临床病理特征与EZH2、BRMS1蛋白表达的相关性尚无明确报道。因此，本研究旨在探讨早期宫颈癌根治术后复发的临床病理特征及与EZH2、BRMS1蛋白表达的相关性，以期为临床预防宫颈癌复发提供更多循证数据支持。
1.1 一般资料 回顾性分析2015年6月至2020年6月在本院收治的238例行宫颈癌根治术治疗的早期宫颈癌患者，根据术后1年随访有无复发分为复发组64例与未复发组174例。纳入标准：均符合《妇产科学》[5]中宫颈癌的相关诊断标准，病理诊断为宫颈癌；
FIGO临床分期均为ⅠA2～ⅡA2期；
临床资料完整。排除标准：合并严重精神障碍疾病者；
妊娠期或哺乳期者；
合并严重心脑、肝肾功能障碍者；
合并其他肿瘤疾病者。
1.2 EZH2、BRMS1蛋白免疫组化检测方法 仪器与试剂：EZH2多克隆抗体（美国艾美捷Epigentek，货号A-2019-050）、BRMS1兔抗人多克隆抗体（美国艾美捷Epigentek，货号ABP52889）。
选择链酶卵白素-过氧化物酶免疫组织化学法检测EZH2、BRMS1蛋白表达水平。将所有患者的石蜡包埋组织准确切片，再经常规脱蜡（放入二甲苯中10 min）及水化处理（无水乙醇-95%酒精-85%酒精-75%酒精各5 min逐级进行）后，加入枸橼酸钠缓冲液进行抗原热修复，滴加一抗[EZH2抗体（1∶100）及BRMS1抗体（1∶410）]4℃过夜，PBS缓冲液冲洗5 min，重复3次，滴加生物素二抗孵育，37℃孵育30 min后，进行PBS冲洗，加入适量DAB显色液进行显色，苏木素染色2 min，1%盐酸酒精分化10 s，二甲苯透明1 min，中性树脂封片，显微镜下观察切片癌细胞细胞核。
结果判定[6]：染色结果均以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性染色。免疫组织化学评分包括染色强度（0分：无明显着色，1分：黄色，2分：棕黄色，3分：黄褐色）、阳性细胞所占比例（0分：阳性细胞数＜5%，1分：5%～25%，2分：26%～50%为，3分＞50%），总分≥2分定义为阳性表达。
1.3 观察指标 根据本研究目的，自行设计调查表，通过电子病例系统收集所有纳入对象的年龄、组织学类型、临床分期、肿瘤直径、淋巴结转移、宫颈浸润深度、分化程度等临床资料，资料收集工作由医院专职人员完成。
1.4 统计学分析 采用SPSS 22.0统计学软件进行数据分析，计量资料（±s）组间差异采用独立t检验，计数资料用（n，%）组间差异比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2.1 临床资料比较 两组患者的组织学类型、肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移、宫颈浸润深度有显著差异（P＜0.05）。见表1。
表1 临床资料比较（n，%）
2.2 EZH2、BRMS1蛋白表达情况比较 238例宫颈癌组织中EZH2表达阳性例数为128例，阳性率为53.78%，见图1；
BRMS1表达阳性例数为38例，阳性率为15.97%，见图2。复发组宫颈癌组织中EZH2阳性表达率为70.31%（45/64），BRMS1阳性表达率为7.81%（5/64），未复发组宫颈癌组织中EZH2阳性表达率为56.32%（83/174），BRMS1阳性表达率为18.97%（33/174）；
复发组中EZH2蛋白的阳性表达率明显高于未复发组（P＜0.05），复发组中BRMS1蛋白的阳性表达率明显低于未复发组（P＜0.05）。见表2。
表2 EZH2、BRMS1蛋白表达情况比较（n，%）
图1 EZH2蛋白在宫颈癌组织中表达阳性；
阴性
图2 BRMS1蛋白在宫颈癌组织中表达阳性；
阴性
2.3 EZH2、BRMS1蛋白表达与宫颈癌术后复发患者的临床特征的关系 宫颈癌术后复发患者EZH2、BRMS1蛋白表达与临床分期、淋巴结转移、宫颈浸润深度有关（P＜0.05），与组织学类型、肿瘤直径（P＞0.05）。见表3。
多项临床研究表明[7]，宫颈癌早期手术治疗后会复发，1年内的复发率大概为50%左右，且复发后患者死亡风险极高。因此，若能早发现、早诊断、早治疗，可以有较好的根治及预后效果。相关研究报道[8]，早期宫颈癌术后复发与患者的多种临床特征密切相关。本次研究中，术后1年随访发现有64例患者癌症复发，复发率为26.89%；
同时分析患者的临床资料发现，组织学类型、肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移、宫颈浸润深度与宫颈癌术后复发有相关性，分析其原因可能是：在组织学类型方面，鳞癌细胞更容易发生远处转移，形成继发肿瘤；
临床分期高、宫颈浸润较深、有淋巴结转移的患者，其肿瘤恶化程度更严重，部分患者及时做了根治手术，也有复发的可能。提示临床需重点关注宫颈癌患者的组织学类型、肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移、宫颈浸润深度，慎重考虑手术方案，是否需要进行术后放化疗，预防肿瘤扩散导致癌症复发。
肿瘤的侵袭和转移是癌症复发的重要阶段，是成功根治肿瘤的最大障碍。已有研究发现[9-10]，EZH2参与多种恶性肿瘤的侵袭和转移，BRMS1具有降低癌细胞侵袭和转移的作用。本次研究中，复发组中EZH2蛋白的阳性表达率明显高于未复发组，BRMS1蛋白的阳性表达率明显低于未复发组，进一步说明早期宫颈癌患者若癌组织中BRMS1阳性表达率较高，可抑制肿瘤转移，控制病情发展；
同时，若EZH2高表达，可能抑制BRMS1，促进癌细胞的侵袭和转移，进而导致宫颈癌复发。多项研究发现[11]，EZH2蛋白在乳腺癌、肝癌、前列腺癌以及宫颈癌等恶性肿瘤中阳性表达明显增高，且与肿瘤增殖、转移、生存时间和不良预后密切相关。本此研究结果与上述报道基本一致，分析原因可能是，EZH2是位于7号染色体的基因，是多梳基因家族的主要成员，属于转录抑制因子[12]，能够抑制多种抑癌基因和肿瘤转移抑制基因的表达，促进肿瘤细胞侵袭转移，因此在复发患者体内呈现高表达；
BRMS1表达能够通过与其他分子形成转录复合物抑制肿瘤转移，因此在未复发患者体内BRMS1表达相对较高。本次研究还发现，宫颈癌术后复发患者EZH2、BRMS1蛋白表达水平与临床分期、淋巴结转移、宫颈浸润深度有关。说明患者临床分期越晚，宫颈浸润越深，且有淋巴结转移，其EZH2表达越高，则BRMS1表达下调或缺失。
综上所述，早期宫颈癌根治术后复发患者，其临床分期越晚、宫颈浸润越深、有淋巴转移，则EZH2蛋白表达越高、BRMS1蛋白表达越低。但本研究仍存在一定的局限性，一是本次研究样本数量较少；
二是本次研究为回顾性研究，可能存在个体差异。还需进一步采用大样本研究对相应的治疗手段进行深入研究，如EZH2抑制剂的使用对预防宫颈癌复发的效果。
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